多肽合成的基本知識

1、多肽合成的基本原理是什么？

多肽固相合成法是多肽合成化學的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產物，合成過程可以連續進行，進而為多肽合成的自動化奠定了基礎。目前全自動多肽的合成，基本都是固相合成。其基本過程如下：基于Fmoc化學合成，先將所要合成的目標多肽的C-端氨基酸的羧基以共價鍵形式與一個不溶性的高分子樹脂相連，然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點，同其它的氨基酸已經活化的羧基作用形成肽鍵，不斷重復這一過程，即可得到多肽。根據多肽的氨基酸組成不同，多肽后處理方式不同，純化方式也有差異。

2.多肽定制服務的質量如何控制？

多肽嚴格按照ISO質量管理體系進行生產，對每條多肽都進行唯一的編號管理，對粗品、純化收集液以及最終凍干品進行HPLC以及LC/MS檢測分析，確保產品的正確性和產品的質量。

3.生物多肽的專業技術以及交貨時間如何？

在多肽化學合成技術方面積累了多項國際領先的困難多肽合成技術，能夠借助多肽片段合成和多肽連接技術實現了長鏈多肽的化學合成；掌握高度疏水的膜蛋白片段合成的增溶技術，完全應用化學合成方法實現了目前國際上最長的膜蛋白化學全合成，多次刷新了世界紀錄；并且應用替代二硫鍵的非天然氨基酸技術實現了多肽環化修飾，將使得合成的多肽藥物更為穩定。普通多肽可以一周時間交貨，大部分可以二周內交貨。數量從毫克到公斤級。

4.什么是多肽的凈含量（肽含量），它的意義是什么？

干品多肽的重量中不僅僅包含多肽，還包含有一些非肽的組份，如水，被吸收的溶劑、配位離子和鹽等。肽的凈含量是指肽在其中的重量百分比，這個百分比的數值范圍很大，可能從50%到90%，取決于純度、序列以及合成和純化的方法，不要將肽的凈含量和肽的純度混為一談，它們是完全不同的兩個概念。純度通常是由HPLC決定的。純度定義的是多肽樣品中含正確序列的組分的百分比，而肽的凈含量是指樣品中肽類物質相對于非肽類物質所占的百分比，肽的凈含量通常是用氨基酸組分分析或紫外分光法測定的。這個信息主要是在一些對肽的濃度很敏感的實驗中，對計算肽的濃度是很重要的。

5.如何保存合成的多肽？

多肽一般長期保存需要避光保存，并應保存在-20度，短期可以保存在4度?？梢远虝r間以室溫運輸。多肽在-20℃很穩定，特別是冷凍干燥并保存在干燥器中，在將它們暴露于空氣之前，冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少，當無法冷凍干燥時，最好的方法是以小的工作樣量存放。對于含Cys,Met orTrP的多肽，脫氧緩沖劑對其溶解必不可少，因為這種多肽可易空氣氧化，在封瓶前，慢慢流過多肽的氮氣或氬氣也會降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有這些肽與不含這些有問題簡單的那些肽相比，生命期有限。

6.為什么有些多肽的合成產率或純度會比較低?

多肽合成與引子合成有比較大的區別，不能合成的引子很少，但是不能合成的多肽經常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這些氨基酸比鄰或重復時，多肽鏈在合成過程中不能完全舒展溶解，合成效率下降。以下幾種情形，合成效率和產物的純度都比較低，如：重復Pro,Ser-Ser，重復Asp，4個連續Gly等。

7.如果我的肽純度是95%，那么，其余的5%都是些什么物質？

多肽的純度通常是通過HPLC，用每分鐘1%的標準乙晴梯度來檢測決定的。合成過程中，氨基酸之間的交聯效率不是總能達到100%，因而產生一系列的氨基酸缺失的雜質。大多數這樣的氨基酸缺失的雜質在純化過程中都被去掉了，但有少數的雜質其色譜表現與目標多肽很相近。這些氨基酸缺失的雜質肽留在了多肽樣品中就構成了余下的幾個百分。

8.多肽是如何純化的?

多肽純化一般使用反相柱(如C8，C18等)，214nm。緩沖體系通常為含TFA的溶劑，pH2.0。Buffer A為含0.1%TFA in ddH2O，Buffer B為1%TFA/ACN/pH2.0。純化前用Buffer A溶解;如果溶解不好，用Buffer B溶解后，然后用Buffer A稀釋;對疏水性強的多肽，有時還需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析多肽粗產物，如果多肽不長(15aa以下)，一般會有主峰，主峰通常為全長產物;對于20aa以上的長肽，如果沒有主峰，HPLC需搭配Mass來判定分子量，進而確定哪個峰是所要合成的多肽。

9.如何從多肽序列中判定多肽的溶解性?

(1)多肽中如果含有高比例的疏水性很強的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，多肽很難溶解與水性溶液中或根本不可能溶解。這些氨基酸無論是純化或合成，都有可能有問題。

(2)一般情況下疏水性氨基酸的比例<50%，不能連續5個連續氨基酸為疏水性，帶電荷的氨基酸的(正電荷K,R,H,N-terminus,負電荷D,E,C-terminus)的比例達到20%，在多肽的N或C短如果能增加極性氨基酸，也可以改善溶解性。

10.多肽與其他化合物或者載體接合考慮的因素有那些？

經常有一些多肽需要與一些藥物或者特定功能的化合物進行連接，或者要把多肽連接到某些載體上去，需要化學鍵進行結合，一般多肽具有氨基或羧酸官能團可以考慮下相應的羧酸或氨基進行縮合，另外一種選擇是通過巰基（thiol）與馬來酰亞胺（Maleimide）在PH 8的環境下連接。多肽中可以通過帶有Cys或者Maleimide官能團進行修飾。Maleimide修飾通?？梢赃x擇化合物3-Maleimidopropionic Acid(CAS 7423-55-4)實現。